上海团结仪器简述荧光显微镜操作教程

　　荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

　　一、荧光显微镜使用方法：

　　(1)将材料片放在载物台上。

　　(2)开启荧光显微镜稳压器，然后按下启动组点燃紫外灯15min内不得关闭，关闭后3min内不得再启动。

　　(3)将激发滤光片转至v，分色片调到v，选用495或475nm阻挡滤光片。

　　(4)选用uvFL40、uvFL100荧光接物镜镜检。

　　(5)在玻片上加无荧光油，先用40x，再用100x调焦镜检，呈现荧光。

　　(7)因荧光物质受紫外光照射时随时间的增长荧光逐渐变弱，因此镜检时应经常变换视野。

　　(8)亦可用uvFL10或uvFL20低倍镜镜检材料（用低倍镜时不加无荧光油）。

　　二、记录荧光图像：

　　荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光光度计、图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果，也必须结合主观的判断。

　　荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很易褪色减弱，要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。只是需要采用高速感光胶片如ASA200以上或24o以上。因紫外光对荧光猝灭作用大，如FITC的标记物，在紫外光下照射30s，荧光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。